光片顯微鏡的使用體驗(yàn)可能感覺與傳統(tǒng)顯微鏡特別不同，因?yàn)榇蠖鄶?shù)設(shè)置都是*數(shù)字化的，沒有目鏡，所以無法通過眼睛快速檢查樣品的位置和方向。此外，位移臺的控制可能與傳統(tǒng)顯微鏡的界面也有很大不同。快速掃描樣品整個深度的能力，無需像共聚焦顯微鏡那樣等待掃描完成，使得光片顯微鏡的工作流程快速且直接。同樣，快速的數(shù)據(jù)獲取速度使得實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蚩焖龠B續(xù)地進(jìn)行。然而，快速的數(shù)據(jù)獲取會導(dǎo)致大量數(shù)據(jù)迅速積累，用戶需在謹(jǐn)慎考慮數(shù)據(jù)存儲與數(shù)據(jù)處理能力的情況下方可進(jìn)行長時間拍攝。

 

　　在普通的寬場熒光顯微鏡中，安裝好的樣品被放置在顯微鏡臺上，然后從上面或下面（垂直或倒置）進(jìn)行照明和檢測。光片顯微鏡由于可以擁有不同的照明路徑，給樣品的放置增加了另一個自由度，從而允許用戶準(zhǔn)確定位樣品。此外，多組數(shù)據(jù)可以從不同的路徑獲得，并拼合在一起，也能使顯微鏡的穿透深度固定的情況下獲得更大的成像范圍。同時，在光片顯微鏡中，樣品的放置方向也比經(jīng)典的單透鏡顯微鏡更為重要。用戶需要使樣品相對于照明軸和檢測軸方向正確：光片需要在不通過樣品的高折射或高吸收結(jié)構(gòu)的情況下到達(dá)感興趣的區(qū)域。

 

　　與傳統(tǒng)熒光顯微技術(shù)不同的是，圖像采集過程中的第一個關(guān)鍵步驟是光片的校準(zhǔn)。在光片顯微鏡中，我們需要辨別調(diào)整光片的基本參數(shù)，即高度和厚度，以及正確地將光片定位在檢測透鏡的焦平面上。這三個步驟對于獲得光片好的層析能力以及可靠性、一致性高的結(jié)果都是不可少的。此外，光片的校準(zhǔn)和對其參數(shù)的了解可能是決定進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)策略的關(guān)鍵性先決條件，例如調(diào)整軸向的步進(jìn)和之后的分析步驟。